Jean Francisco Rosa Ribeiro (Catálogo USP)
Master's Dissertation
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Author
Full name
Jean Francisco Rosa Ribeiro
Filiation: Ângelo Rosa Ribeiro and Oneida Ferreira Ribeiro
Place and birth: Goiânia-GO
Filiation: Ângelo Rosa Ribeiro and Oneida Ferreira Ribeiro
Place and birth: Goiânia-GO
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
São Carlos, 2013
Supervisor
Committee
Montanari, Carlos Alberto (President)
Santos Neto, Álvaro José dos
Silva, Maria Fatima das Graças Fernandes da
Santos Neto, Álvaro José dos
Silva, Maria Fatima das Graças Fernandes da
Title in Portuguese
Estudo in vitro do metabolismo microssomal hepático de agentes tripanossomicidas
Keywords in Portuguese
biotransformação
citocromo P450
espectrometria de massas
fluorimetria
HPLC
metabolismo de fármaco
citocromo P450
espectrometria de massas
fluorimetria
HPLC
metabolismo de fármaco
Abstract in Portuguese
Em face das recentes exigências das
agências regulatórias quanto à aprovação de novos fármacos, os estudos
de biotransformação têm-se tornado uma etapa indispensável para a
identificação e otimização de compostos bioativos. O objetivo desses
estudos é identificar, já nas fases iniciais da descoberta de fármacos,
candidatos que apresentam propriedades indesejáveis como a (i) presença
de metabólitos ativos ou tóxicos; (ii) inibição de enzimas
metabolizadoras; (iii) depuração metabólica inadequada, entre outras.
Neste estudo, foi realizada a caracterização metabólica e a
identificação de possíveis inibidores das enzimas do citocromo P450 de
oito promissores candidatos a fármacos, identificados através de ensaios
virtuais como inibidores da TcGAPDH, Cruzaina e TcDHODH, todas do Trypanosoma cruzi,
agente causador da doença de Chagas. Esses compostos foram testados
contra as três principais isoformas do citrocromo P450: CYP 3A4, CYP 2D6
e CYP2C9. Os valores de IC50 de 1,4 µM e 1,3 µM contra a
CYP2C9 foram encontrados para os compostos Nequimed53 e Nequimed125,
enquanto o Nequimed42 inibiu a CYP 3A4 com um valor de IC50
de 7,12 µM. Posteriormente foi conduzida a caracterização metabólica dos
compostos Nequimed53 e 125 com foco na identificação dos principais
metabólitos, sítios de metabolismo e vias de biotransformação através da
técnica de LC-ESI-QqTOF-MS. Para ambos os compostos, a
biotransformação por microssomas extraídos de fígado de ratos deu-se
preferencialmente por uma única via dependente de NADPH. No caso do
Nequimed54, o metabólito formado apresentou uma variação da razão m/z
de +16, indicando a ocorrência da hidroxilação do composto parental,
enquanto que para o composto Nequimed125, o metabólito formado
apresentou uma variação da razão m/z de -28, condizente com a perda de um fragmento etila do composto parental.
Title in English
Liver microsomal metabolism of compounds with potential trypanocidal activity
Keywords in English
biotransformation
cytochrome P450
drug metabolism
fluorimetry
HPLC
mass spectrometry
cytochrome P450
drug metabolism
fluorimetry
HPLC
mass spectrometry
Abstract in English
In the light of recent demands from
regulatory agencies for the acceptance of new drugs, the
biotransformation studies have become an essential step for the
identification and optimization of bioactive compounds. The objective of
these studies is to identify compounds that have undesirable properties
such as (i) the presence of toxic or active metabolites, (ii)
inhibition of metabolizing enzymes, (iii) excessive metabolic clearance,
inter alia. In this study we characterized the metabolism and
cytochrome P450 inhibition of eight compounds identified by virtual
screening as inhibitors of TcGAPDH, Cruzain and TcDHODH
which are of interest as targets for intervention in treatment of
Chagas Disease. These compounds were tested against cytochrome P450
isoforms 3A4, 2D6 and 2C9. IC50 values of 1.4 µM and 1.3 µM
against CYP 2C9 were observed for Nequimed53 and Nequimed125.while
Nequimed42 inhibited CYP 3A4 with an IC50 of 7.1 µM. Subsequently, we characterized the in vitro
metabolism of Nequimed53 and 125 with a focus on metabolite
identification and biotransformation pathways using the LC-ESI-MS-QqTOF
technique. For each, the biotransformation by rat liver microsomes
occurred by a single NADPH-dependent pathway. For Nequimed54, the
observed metabolite [M+16]+ indicated hydroxylation of parent compound. The metabolite [M-28]+ observed for Nequimed125 indicated desethylation of the parent compound.
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This document is only for private use for research and teaching activities. Reproduction for commercial use is forbidden. This rights cover the whole data about this document as well as its contents. Any uses or copies of this document in whole or in part must include the author's name.
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Publishing Date
2013-07-31
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